师兄又在胡扯了-Western Blot

大家好，阿呆师兄又出现了。不知道上个月说的几本书有几个人看了或准备看的。其实原本我应该深藏功与名，大隐隐于市了，不知道大家还记不记得短腿师妹前阵子说“宇宙实验媛喊你来拿三位数稿费了”

阿呆 宇宙实验媛
大家好，阿呆师兄又出现了。不知道上个月说的几本书有几个人看了或准备看的。其实原本我应该深藏功与名，大隐隐于市了，不知道大家还记不记得短腿师妹前阵子说“宇宙实验媛喊你来拿三位数稿费了”
一开始在考虑要不要投稿的时候，其实我是拒绝的。因为，你不能让我投，我就马上去投，第一我要酝酿一下，因为我不愿意投完了以后再加一些特技上去，稿子“咣”一下，很亮、很炫，这样观众出来一定会骂我，根本没有内容的稿子，就证明是个假的。后来发生了一件惨绝人寰的事情……
是的，我的肾6摔了个脸着地。当时第一反应就是，啊！又是一笔开销啊！！手里没粮，心里很慌！于是我就来水了……除了短腿师妹变成了短腿老板外，其他也没什么嘛……（凑表脸）
可是写啥呢，大家知道短腿他们偏干实验，而我是个纯种湿实验员，没有干货只会浑水摸鱼……直到有一次和师妹聊天提到Western Blot（WB）。

好吧我就来试试看写这个，虽然我觉得可能没有观众愿意看这些……毕竟作为一个生物狗，不可能不知道WB啊！我打开了某度，输入“Western Blot”

去掉最上面的广告，大家可以看到，确实是随便找找一大把，这还需要我写？就随便点开那个“这一篇就足够了!Western blot详细步骤与经验交流”看下。Emmm……写得蛮清楚的嘛……（唉咦，谁扔的番茄？）好吧好吧，如果你跟着我点进去看了，会发现这个网页里的内容确实基础地描述了WB的过程。但我知道各位看官一定是不会满足于这些。来来反正你都打开网页了，不如点到某度文库里去，请输入“Western_Blot详解及问题分析”看见那个53页的PPT没？没有下载券就和我一样在线看吧，把它仔细看完，WB的理论知识可以说已经掌握了。如果你是个WB小白，现在已经升级成WB王语嫣；如果已经有点经验了，那现在有没有一种通透了的感觉。
然而上手做起来依然会有各种问题。很正常啊，不然怎么会有那么多WB技术求教贴、经验分享贴一直在冒出来？做实验不会不知道丁香园论坛的吧，emmm…对对就是那个临床的丁香园。去丁香园论坛搜索“Western Blot”

我只是随便截图的，各种技术问题几乎都能在上面找到，毕竟你不是第一个吃螃蟹的人。当新手光环还在的时候，一般都会觉得WB果然是个基础实验。当光环褪去的时候，就知道自己连个基础都没有。当然了，有些人可能光环的时间比较长，有些人可能……没有光环……
不记得谁说的选择比努力重要，在WB里真是体现的淋漓尽致。上样前你得选合适浓度与孔数的胶，（取决于目标蛋白大小和上样体积）；run起来的时间不能太长也不能太短（还是大小）；转起来除了选时间，先要选择转膜方式和膜的种类（蛋白大小、结果显影还是扫描）；封闭你是选奶粉还是BSA（搞不搞磷酸化）；孵个一抗简直就是WB的灵魂啊没选好全都白辛苦（这个靠try啊）；准备化学发光呢还是荧光……哪一条没选好，努力产生的结果大概率是垃圾（戾气了，要“inner peace”……呼）。
如果对WB有点情怀，可以看看丁香园的那篇帖子“【建议】穷人的劳斯莱斯-我的五年western blot体会”老人大概会有点感触吧。好了，就不多说了，字数凑够了，拿去换点米……授人以鱼不如授人以渔嘛，是吧…（还想要鱼？没看见前面写的么，跟我这个浑水摸鱼的人要鱼？）好吧，来个太长不看版吧：去看文库的ppt，不会的朋友当科普，会点的朋友当详细复习，万一醍醐灌顶了呢。动手问题去丁香园，生物秀啥的也行，平时多看看抗体说明书也会有惊喜。反正我就是这么过来的……想苦练WB技艺的朋友可能会对此篇不满吧，哎朋友啊你是不知道，其实我是在帮你啊……
贴一个全自动WB仪器的视频若干年后：“在岗位上竞争不过机器是种怎样啊体验”……瑟瑟发抖.jpg
（所有图片均来源于网页截图或自己手机截图）